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Solução de problemas de ensaios de imunofluorescência |
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Problema: Células de antígeno ou substrato lavadas durante o procedimento.
Causas possíveis: |
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| 1. | É possível lavar em excesso uma lâmina de substrato. Recomendamos, especialmente para ensaios IgG, que as lâminas sejam lavadas levemente utilizando uma pisseta para lavagem contendo PBS. Concentre o fluxo do tampão de lavagem para atingir levemente o meio da lâmina, e não as cavidades do antígeno. Não mergulhe no tampão de lavagem por longos períodos ou submerja com água destilada; basta usar a pisseta para lavagem 3 vezes e aplicar o conjugado. Para ensaios IgM, recomenda-se que o tampão de lavagem (após a terceira lavagem) permaneça nas cavidades da lâmina por alguns minutos antes da remoção e adição de conjugado. |
| 2. | Se somente alguns dos soros tenderem a se descolar do substrato, o problema pode ser proteases bacterianas devido ao crescimento bacteriano no soro. |
| 3. | Se a perda de substrato estiver nas porções ou nas linhas, o substrato possivelmente foi arranhado pelo técnico ao aplicar soro ou conjugado durante o ensaio. A aplicação de soro ou conjugado deve ser feita a partir da borda das cavidades do substrato. |
Perguntas/problemas
- O controle positivo está negativo ou muito fraco.
- Células de antígeno ou substrato manchadas ou ausentes de cavidades antes do teste.
- Células de antígeno ou substrato lavadas durante o procedimento.
- O controle negativo é positivo.
- As reações são mais fortes nas bordas da cavidade do que na parte central da mesma.
