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EXCELÊNCIA DE CONFIANÇA EM DIAGNÓSTICO DE DOENÇAS TRANSMITIDAS POR VETORES

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Solução de problemas de ensaios de imunofluorescência


Problema: Antígeno lavado durante o procedimento.

 

Causas possíveis:


1. É possível lavar em excesso uma lâmina de substrato. Recomendamos, especialmente para ensaios IgG, que as lâminas sejam lavadas levemente utilizando uma pisseta para lavagem contendo PBS. Concentre o fluxo do tampão de lavagem para atingir levemente o meio da lâmina, e não as cavidades do antígeno. Não mergulhe no tampão de lavagem por longos períodos ou submerja com água destilada; basta usar a pisseta para lavagem 3 vezes e aplicar o conjugado. Para ensaios IgM, recomenda-se que o tampão de lavagem (após a terceira lavagem) permaneça nas cavidades da lâmina por alguns minutos antes da remoção e adição de conjugado.
   
2. Se somente alguns dos soros tendem a se remover do substrato, o problema pode ser proteases bacterianas devido ao crescimento bacteriano no soro.
   
3. Se a perda de substrato estiver nas porções ou nas linhas, o substrato possivelmente foi arranhado pelo técnico ao aplicar soro ou conjugado durante o ensaio. A aplicação de soro ou conjugado deve ser feita a partir da borda das cavidades do substrato.
   
   

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